1. 产品介绍
microRNA（miRNA,微RNA ）是存在于植物和动物体内，高度保守，长度大约在21个核苷酸的非蛋白编码小RNA。其主要生物学作用是通过结合mRNA的3’非编码区（3-UTR）来调控哺乳动物细胞中30%的基因表达。miRNA所参与的生物及疾病过程包括：胚胎发育，细胞分化，癌症，病毒感染等。在人基因组中，已经确定有多达400多种miRNA，其中许多miRNA只相差一个或者几个核苷酸。

检测单个microRNA表达水平的途径有：Northern blotting,定量PCR,和invader assay。但是，Northern Blotting的缺点是灵敏度低，和不宜进行批量检测。而定量PCR和Invader Assay需事先将RNA转换成cDNA 。

美国Signosis公司推出的专利产品miRNA微孔板测定（plate assay)试剂盒有效地克服了以上缺点，既不需要生化反应来转化miRNA,又大大提高了试验的灵敏度。 更为重要地是，整个试验过程操作起来非常简单，只需要进行孵育和洗涤，就可以得到高质量的试验结果。

Signosis的miRNA微孔板测定（plate assay)试剂盒具有以下优点：

• 试验过程简单–像ELISA一样来检测miRNA,也不需要使用逆转录酶来转化成cDNA。整个试验过程就是简单地温育和洗涤。
• 高灵敏度和识别力–和Northern Blotting比较，灵敏度提高了1000倍；而且可以有效地检测出不同的isoforms。
• 定量比较–可以定量分析不同样品间基因的表达水平
  

2.专利技术原理
首先样品中的miRNA和试剂盒提供的寡核苷酸混合夜反应形成一个杂交体。该杂交体包括miRNA分子以及位于其两边的寡核苷酸序列，一边是捕捉序列，另一边是生物素标记的检测序列。 这两个序列通过两个中间桥序列和miRNA分子形成一个杂交体。 其中的一个中间桥序列同时和miRNA以及捕捉序列杂交，而另外一个中间桥序列同时和miRNA的另外一半序列以及检测序列结合。该杂交体通过和预先结合在微孔板上的序列杂交，从而被固定在板子上。 最终通过和亲和素－HRP反应来现色。通过发光的强弱来反映miRNA的表达水平。 该技术具有很高的灵敏性，即使只有一个碱基错配就会影响到整个杂交体的形成。

(A)miRNA plate assay的原理。(B)人肌肉细胞，心脏细胞，以及肝细胞中提取出的总RNA(5ug),通过Northern Blotting (上）和miRNA微孔板检测试剂盒(miRNA plat assay,下）来测定miR-133和miR-1表达的情况。(C)Northern blotting(上)和miRNA微孔板（下）检测miR-133的比较。

可检测的miRNA有：